新冠病毒肺炎流式標本處理注意事項

前言：國家衛健委批準，1月25日發布的《北京協和醫院關于“新型冠狀病毒感染的肺炎”診療建議方案（V2.0)》**條“2019-nCoV病人的診療-診斷標準中提到：對于急性發熱對于急性發熱（72h內，體溫大于37.5度）且肺部影像學正常者，若外周血**細胞***小于0.8×109/L，或出現CD4及CD8 T細胞計數明顯下降者，即使核酸檢測未呈現陽性，均應居家隔離密切觀察。病人常規檢查中提到：1、篩查病例，就診當日可酌情查炎癥因子（IL-6,IL-10,TNF-α）、TB亞群11項.2、確診病人序貫檢查，第5-7天若有條件可復查TB**細胞亞群11項。

可以從診療指南中看到，**功能越來越受重視，尤其是臨床**的過程中**功能狀態的改變。僅僅做**細胞亞群還不夠，活化以及T細胞功能評價的指標也必不可少。

正是因為**受到臨床的重視，許多新冠病人的定點醫院都開展了流式的檢測。而我們的流式工作的老師，除了結果的準確及解讀以外，也需要關注生物**的防護。

整理了流式樣本處理過程中一些注意事項，獻給我們的流式工作者們。

01樣本加樣
建議在生物**柜進行實驗操作，如有液體濺出，用浸濕75%酒精的紗布覆蓋后擦拭。個人按照3級生物**進行防護。

02溶血及固定
根據衛生部2011年發布的《流式細胞術檢測外周血**細胞亞群指南》，盡量使用含固定劑的溶血素（如貝克曼庫爾特的流式細胞分析用溶血劑PN: A11895，或可延長溶血時間至30min，加等量pbs混勻后上機），可以達到滅活病毒的作用。
如采用貝克曼庫爾特自動溶血儀器，可配套使用Beckman Coulter Immunoprep（PN: 7546946），程序運行結束后放置30min，可以達到滅活病毒的作用。
如使用其他不帶固定劑成分的溶血素（如氯化銨，或者貝克曼庫爾特 Versalyse等, PN: A09777），也可以配制0.1%-2.0%的多聚甲醛或甲醛，或者稀釋好的細胞保存液（PN：A07800）在溶血時一起加入，并且放置30min，可以達到滅活病毒的作用。

03混勻、離心等步驟防護
滅活前的樣品處理步驟，須嚴格按照三級防護，謹防氣溶膠污染，例如：

使用帶生物**密封蓋或密封杯的離心機進行離心（如Beckman Coulter高速冷凍離心機配套的 AeroSolve透明密封杯系列，359232），樣品管/流式管*好帶密封蓋離心，不使用自動脫帽離心功能；

即使室溫離心，也選用密封更良好的制冷型離心機（如Beckman Coulter Avanti J-15R，PN: B99515），并置于負壓抽風區域；

離心后靜置10-30分鐘再開蓋，仔細觀察樣品無泄漏后，再把透明密封杯移至生物**柜再開蓋取樣。

04儀器的清洗及維護
如有樣本的灑溢，請用浸濕75%酒精的紗布覆蓋30min后擦拭，包括樣本進樣針。
流式細胞儀的廢液桶中需要裝有占其體積 1/10的0.71mol/L次氯酸鈉 (未稀 釋的家用漂白劑)。 實驗室設備應該用具有滅活傳染源作用的溶液或新配制的 10%家用漂白劑** ,尤其在設備維修和保養前給予嚴格**。

流式工作者們請在確認防護**的情況下進行實驗，貝克曼庫爾特的技術應用專家們時刻準備著做好支持工作，共克時艱！

涉及的產品信息及注冊證號：
PN: A11895 流式細胞分析用溶血劑，備案號：國械備20170672號
PN: 7546946血細胞分析用溶血劑，備案號：國械備20170373號
PN: A07800 細胞保存液，備案號：國械備20140286
PN: B99515 高速冷凍離心機；備案號：國械備20171151號
PN: A09777. 血細胞分析用溶血劑國械備20140189號

參考資料：
1. 《北京協和醫院關于“新型冠狀病毒感染的肺炎”診療建議方案（V2.0)》
2. 2019新型冠狀病毒相關實驗室檢測的生物**指南（試行**版）--中華醫學會檢驗分會
http://www.cslm.，org.cn/cn/news.asp?id=73.html&from=gr，oupmessage&isappinstalled=0
3. 流式細胞術檢測外周血**細胞亞群指南--2011版衛生部行業標準（下載文件）

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